貨號：M5124

儲存條件：-20℃

產品組成

產品簡介

M-MLV GIII Reverse Transcriptase是通過基因修飾和重組技術獲得的第三代M-MLV逆轉錄酶。該酶相對于野生型M-MLV逆轉錄酶去除了RNase H活性，并大幅提高了熱穩(wěn)定性（the best 反應溫度為50℃），從而大大提高了合成first鏈cDNA時的特異性和長度（最長可達12 kb），增強了對RNA復雜二級結構的耐受性。

酶活單位定義

37℃條件下，以Poly(A)-Oligo(dT)為模板/引物，在10 min內， 摻入1 nmol的[³H] dTTP所需要的酶量定義為1個活性單位（U）。

質量控制

宿主原性DNA檢測

無宿主DNA污染

核酸內切酶殘留檢測

將酶液與超螺旋質粒DNA在37℃溫育4h，通過DNA電泳檢測質粒無變化。

核酸外切酶殘留檢測

將酶液與雙鏈DNA底物在37℃溫育16h，通過DNA電泳檢測雙鏈DNA底物無變化。

使用方法

質粒載體線性化與去磷酸化同步反應流程

1. 于冰上配制如下反應體系：

2. 輕柔吸打混勻后，瞬離；a. 推薦使用試劑盒提取的已去除基因組DNA污染的高質量RNA作為模板。

3. 若使用Oligo(dT)₂₀或基因特異性引物，50℃溫育30 min；若使用隨機引物，先25℃溫育5 min，之后50℃溫育30 min；

注：若目的cDNA小于3 kb，溫育時間可縮短為15 min。

4. 反應結束后，85℃溫育5 min 以終止反應；

5. 將獲得的 cDNA 溶液置于冰上，用于后續(xù)實驗。

注：cDNA 溶液置于 -20℃可保存半年；置于 -80℃可長期儲存